Suckow, A: Charakterisierung von Ionenkanälen der ether-á-go

Der ektopen Expression des ether-à-go-go-Kanals des Menschen (hEAG1) außerhalb des Zentralnervensystems wird onkogenes Potential zugeschrieben. Dieser spannungsabhängige Kaliumkanal, der in zahlreichen Krebszelllinien und Tumoren unterschiedlichen Ursprungs nachgewiesen werden konnte, erhöht die Proliferationsrate von Zellen und bewirkt einen Verlust der Kontaktinhibition. Ausserdem verändern sich die biophysikalischen Eigenschaften des hEAG1-Kanals in Abhängigkeit vom Zellzyklus. Während diese Änderungen der Kanaleigenschaften gut dokumentiert sind, sind viele Fragen zum Einfluss des hEAG1-Kanals auf die Wachstumseigenschaften von Zellen offen. Daher sollte in der vorliegenden Arbeit mittels molekularbiologischer und zellbiologischer Methoden dieser Zusammenhang genauer untersucht werden. Um die Grundlage der pathogenetisch bedeutsamen Fehlregulation in Krebszellen aufzuklären, sollte zunächst die Struktur des heag1-Gens analysiert und dessen Promotorbereich identifiziert werden. Durch Analyse von genomischen und cDNA?Sequenzen gelang es die Exon-Intron-Struktur des heag1-Gens zu ermitteln. Das heag1-Gen ist auf dem langen Arm von Chromosom 1 lokalisiert (1q32.1-32.3) und in 11 Exone unterteilt, deren Größe zwischen 79 bp und 858 bp variiert. Der intronische Bereich dieses Gens umfasst eine Länge von 450 kb. Durch PCR-basierte Methoden konnte ein 450 bp langes Fragment der 5'?UTR amplifiziert werden. Da mehrere PCR-basierte Methoden zur darüber hinausgehenden Amplifikation der 5'-UTR aufgrund des hohen GC-Gehalts dieser Region scheiterten, wurde eine Cosmidbank mit einer heag1-spezifischen Sonde durchmustert. Dabei wurden sieben positive Klone identifiziert, mit deren weiterer Charakterisierung begonnen wurde. Um zu untersuchen, ob Rekombination oder alternative Prozessierung für die ektope Expression von hEAG1 von Bedeutung sind, wurden Northern-Blot-Analysen verschiedener Krebszelllinien